第四节　光学显微镜的使用

一、显微镜的简介

显微镜是生药学、生物学和医学等学科观察研究的重要工具。通过显微镜的使用，人们可以看到肉眼看不到的细小结构，使认知范围极大地扩展。显微镜的种类很多，常分为光学显微镜和非光学显微镜。光学显微镜包括单式显微镜和复式显微镜。学生实验常用的复式显微镜是研究生药细胞结构、组织特征及器官构造的重要工具。

二、显微镜的构造

复式显微镜可分为单筒镜与双筒镜。两者基本构造（图1-2-1）大致相同，可分为用以成像所用的光学系统和装置光学系统的机械系统。

1.机械系统

（1）镜座　显微镜的基座部分，常为马蹄形，用以稳固和支持镜身。

（2）镜柱　连于镜座的直立支持部分。

（3）镜臂　镜柱与镜筒间的连接部分，弯曲如臂，为取放镜体时的手握部位。镜柱与镜臂之间有一活动关节，可使镜体在一定范围内转动，便于观察。近年来生产的显微镜，其镜柱、镜臂多连为一体，无倾关节。

（4）镜筒　显微镜上部中空的圆孔，上端放置目镜，下端与物镜转换器相连。

（5）物镜转换器　固定在镜筒的下方。具有安装接物镜的螺旋口，转动转换器，可更换物镜，并将物镜转移到镜筒的正下方，保证物镜与目镜的光线合轴。

（6）载物台　放置标本的圆形或方形平台，中央有一通光孔。台上装有压片夹或机械移动器，用以固定或调节玻片的位置。

（7）调焦装置　为调节镜筒升降的齿轮，通过调节物镜与标本间的距离，得到清晰的物像。通常在镜臂两侧，有大小两对之分。大的一对称为粗调焦旋钮，转动一周可使镜筒升降10mm的距离；小的一对称为微调焦旋钮，转动一周可使镜筒升降0.1mm的距离。

2.光学系统

（1）目镜　安装于镜筒上端，又称接目镜，可将物镜放大了的实像进一步放大。其上端刻有5×、10×、15×等字样，表示放大倍数。

（2）物镜　装在物镜转换器上，通常可分为低倍镜（4×、10×、15×）、高倍镜（40×、45×、80×）和油镜（100×）三种。

（3）聚光器　位于载物台下，用以聚集来自反光镜的光线，透过通光孔照射于标本物体上。聚光器常可上下或左右旋转，装有虹彩光圈操纵杆，可使虹彩光圈口径扩大或缩小，以控制通光量。

（4）光源　早期的显微镜使用反光镜将光线反射到聚光器上，现在使用的显微镜多采用电光源（集光器），多为6V、10V的碘钨灯。

三、显微镜的成像原理

显微镜主要是依据凸透镜成像原理对物体进行放大。

显微镜的目镜和物镜都可以看成是一个凸透镜。标本经过物镜第一次放大后，再通过目镜进行第二次放大。因此，我们观察实验标本时，所看到的最后物像，是经二次放大的、方向相反的倒置虚像，而物体最后的放大倍数是目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。

四、显微镜的使用

1.取镜

从镜箱中取出显微镜时，以右手握住镜臂，左手平拖镜座，保持镜筒直立向上，将显微镜平置于桌上座位的左前方，距桌缘5～6cm。

2.对光

旋转转换器，将低倍物镜对准载物台圆孔，用左眼在目镜上观察。将反光镜转向光源，使光线射入镜筒，并调节光圈，达到视野光线清晰明朗，成为均匀而明亮的白光。若使用电光源，应接通电源，打开显微镜开关，旋转亮度调节旋钮，使光亮强度合适并充满整个视野。

3.低倍镜观察

（1）将标本玻片放于载物台上，盖玻片朝上，使检视物对准光孔，然后用压片夹将玻片固定。

（2）先从侧面观察物镜与玻片之间的距离，并顺时针方向调节粗调焦旋钮，使低倍镜距离玻片0.5～1cm。然后在目镜上观察，再慢慢逆时针方向转动粗调焦旋钮至看到放大的物像，随后改用微调焦旋钮调节，直至物像最清晰为止。

（3）焦点调好后，可根据需要，移动玻片使要观察的部位处于最佳位置。在视野中看到的是检视物的倒像，因此在移动玻片时要向相反的方向移动。

此外，还可以调节聚光器及虹彩光圈，对视野内的光线进行调节。

4.高倍镜观察

（1）在低倍镜中找到物像后，将需要放大部位移至视野中央（因高倍镜只能将视野中心的一部分放大），直接转动物镜转换器，将高倍镜转至中央并定位。

（2）转换至高倍镜后，正常情况下能够看到模糊的物像，只需稍微调动微调焦旋钮，便可看到清晰的物像。

（3）转换至高倍镜后，视野内的亮度必然比低倍镜时变暗，需要重新调节聚光器及虹彩光圈，对视野内的光线进行调节。

5.收镜

观察结束后，应先升高镜筒或降低载物台，抽出玻片，然后转动物镜转换器，使物镜镜头与通光孔错开，再降下镜筒，用亮度调节旋钮将光源亮度降至最低，后关闭电源（或竖直反光镜）。擦净镜体，罩上防尘罩。最后，按照取镜要求对号归入显微镜的镜箱内。

五、显微镜使用的注意事项

（1）携镜时，必须右手握紧镜臂，左手托住镜座，切不可一只手提取。

（2）放置显微镜时，勿离桌边太近，镜体的倾斜度不得超过300°，防止倾倒坠地。

（3）使用单筒显微镜观察时，必须用双眼，切勿紧闭一眼。

（4）勿用污物、水、药品等沾污显微镜的各部位，保持显微镜的清洁。光学部分的灰尘必须用镜头毛刷拂去，或用吹风球吹去，再用擦镜纸轻擦，切忌用手指或其他粗糙物如纱布等擦拭，以免损坏镜面。

（5）所观察标本必须加盖盖玻片，制作带水或试剂的玻片标本，必须两面擦干再放在载物台上观察，以免溶液流出污染和腐蚀镜体。

（6）如遇机件失灵，使用困难时，绝不可强行转动，更不能任意拆修，应立即报告指导教师解决，以免造成损坏。

（7）不用时应加塑料罩，及时放入镜盒内。